可食動物肌肉、肝臟和水檢測中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定——分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

4.2.2.6測定

(1)液相色譜條件

色譜柱：Discovery C18色譜柱，5μm，150mm×2.1mm(內徑)或相當者；柱溫：40℃；流動相：甲醇+水(40+60，v/v)；流速：0.30mL/min；進樣量：20μL。

(2)質譜條件

離子源：電噴霧離子源；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：多反應監測(MRM)；電噴霧電壓：-1750V；霧化氣、氣簾氣、輔助加熱氣、碰撞氣均為高純氮氣及其他合適氣體；使用前應調節各氣體流量以使質譜靈敏度達到檢測要求；輔助氣溫度：500℃；定性離子對、定量離子對、采集時間、去簇電壓及碰撞能量見表4-7。

(3)定性測定

每種被測組分選擇1個母離子，2個以上子離子，在相同實驗條件下，樣品中待測物和內標物的保留時間之比，也就是相對保留時間，與標準溶液中對應的相對保留時間偏差在±2.5%之內；且樣品中各組分定性離子的相對豐度與濃度接近的標準溶液中對應的定性離子的相對豐度進行比較，偏差不超過表1-5規定的范圍，則可判定為樣品中存在對應的待測物。

(4)定量測定

在儀器最佳工作條件下，對基質混合標準工作溶液進樣，以標準溶液中被測組分峰面積和氘代氯霉素(d5-氯霉素)峰面積的比值為縱坐標，標準溶液中被測組分濃度與氘代氯霉素(d5-氯霉素)濃度的比值為橫坐標繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中待測物的響應值均應在儀器測定的線性范圍內。內標法定量。

4.2.2.7 分析條件的選擇

(1) 提取凈化條件的選擇

1)樣品提取液的選擇

甲砜霉素、氟苯尼考易溶于乙酸乙酯、乙腈。試驗表明，采用堿化乙酸乙酯可提高甲砜霉素回收率，使上述兩個化合物回收率都符合要求，因此本實驗選用堿化乙酸乙酯作為提取溶劑。分別用乙酸乙酯-25%氨水(100+1)、乙酸乙酯-25%氨水(100+2)和乙酸乙酯-25%氨水(100+3)的堿性乙酸乙酯作為提取液，在同--添加水平，相同實驗條件下，三者均能達到滿意的回收率。但乙酸乙酯-25%氨水(100+3)的堿性乙酸乙酯的回收率實驗更穩定。因此在本方法中選擇含有乙酸乙酯-25%氨水(100+3)的堿性乙酸乙酯作為提取液。

2) 凈化條件的選擇

樣品的乙酸乙酯萃取液中含有類脂物，需凈化。通過實驗以水-正己烷液液分配除脂，效果明顯且回收率高。

3) 殘渣溶解度實驗

樣品的乙酸乙酯萃取液濃縮后，殘渣用水溶解。分別用1mL、2mL、3mL水溶解殘渣，結果表明1mL、2mL、3mL水溶解殘渣，氯霉素和氟苯尼考的回收率無明顯差異，回收理想。而以3mL水溶解殘渣，且超聲5min，甲砜霉素的回收率最高。因此采用3mL水溶解殘渣，且超聲5min。

(2) 儀器條件的優化

1) 質譜條件的優化

蠕動泵以10uL/min的流速連續注射0.1mg/L的氯霉素類標準溶液入TurbolonSpray電離源中，在負離子檢測方式下對三種氯霉素類進行一級質譜分析(Q1掃描)，得到分子離子峰，對各準分子離子峰進行二級質譜分析(子離子掃描)，得到碎片離子信息。由此確定定性用的各離子對。采用MRM模式采集數據，選擇駐留時間為200ms，優化各離子對的去簇電壓(DP)，碰撞氣能量(CE)，聚焦電壓(FP)，入口電壓(EP)，碰撞池出口電壓(CXP)。

2) 色譜條件的優化

采用“T”三通方式，即蠕動泵以10μuL/min的流速連續注射0.1mg/L的氯霉素類標準溶液，流動相則以300uL/min的流速與氯霉素類標準溶液混合后進入離子源來進行優化。當分別用0.1%甲酸、0.1%乙酸、1mmol/L醋酸銨溶液代替流動相組成中的水，未發現氯霉素靈敏度的明顯變化。實驗以乙腈-水(30+70，v/v)作為流動相，未觀察到CAP靈敏度的顯著提高。以甲醇-水(40+60，v/v)作為流動相，靈敏度足以滿足要求。

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